为友情 为信仰

不得不说：新鲜置顶寡人原创小说《那一夜 that night》，吐血推荐，先睹为快！

新家 http://hghg.geowhy.net/

新想念杜为红

无论什么时候，

我都一直想念她。

我的，

伟大的，

物理化学老师！

P.S.敬爱的杜老师，我能来拜访您吗？

我如此的崇拜他（三）

——When I miss you

说好了每一轮rotation结束就要写一篇的。现在，我的最后一轮rotation也结束了，这是终极篇。

我定在了一个号称和处女座很配的魔羯座的实验室里，所谓的科研生涯正式开始。

就在我定实验室的那一天，我的偶像呀，却正式退出了实验室——有的人进去了，有的人有出来了——我对老板这么说，老板说这叫select out!

外面的世界很精彩，外面的世界很无奈。我开始慢慢区分在实验室里面的我和实验室外面的我。然后，不知怎么的，人格就开始分裂了。

其实我也很惆怅。

比如，我打电话的时候用普通话说“主旋律”事，用四川话说“贺岁”事，用各种各样的语调说“文艺”事。有一部叫《云水谣》的电影被评论为有机结合了“主旋律”、“贺岁”以及“文艺”三大元素，我心血来潮的时候花了20元去看，觉得还是很值的。

有一个希望凭借自己的亲妈骂自己拍暴露露点照片来发家致富的女歌手唱到：“山有两面，一面是阴，一面是阳；路有两条，一条是短，一条是长。”我已经快记不得那些在阳光灿烂清晨坐在麦当劳里假正经背单词一边聊天一边续红茶的日子了，只是记得被没阳光照到的地方很暗，被阳光照到的地方很亮。

奶奶来我的实验室参观了一下，总体感觉是像731——进门出门三步一岗五步一哨的——刷几次门禁卡再穿过所谓的防火门就可以把滚滚红尘都丢在身后了。

当然，现在看来，出去也挺容易。

从所里到城里是有一趟城铁连通的。我周二晚上坐车的时候总能碰见一个从西二旗站上来的卖唱的帅哥。他背着一把吉他，唱的都是许巍的歌，以及自己的原创歌曲《五道口》——大致歌词是什么“五道口，一个十字路口”云云。虽然我一直也没有给过他钱，但是实话实说，他除了到高音的时候会把左脚抬起来以外，唱得还是挺好的。直到有一次，我让他唱了一首《礼物》，然后帮他唱了一下和声……总之我觉得我好像把他打击到了。于是我只好翻了翻钱包，发现最小面值的纸币居然高达5元！想想我也算是唱了一次live版，几番犹豫之后便也还是给了他。我旁边的人说他可能2年后就比周杰伦还要火，我就决定务必要认识他。

有些人火了，有些人却废了。以前看似没戏的教授拿到大课题了，以前看似有戏的老师变成图书管理员了；以前看似躲躲藏藏的李亚鹏王菲夫妇勇于面对兔唇了，以前看似晶莹剔透的范冰冰公正自己从未整过容了；以前看似酒肉的朋友开始想念了，以前看似亲密的爱人开始遗忘了。以前我们有多少看见其实只是看似，而现在有多少看似根本上就是看见？

我们只求一个字，那就是“妥”！

很多人的blog上喜欢推荐歌曲，我学到了很多。比如《影子》、《If》、《Hopes and fears》、《colors》以及《everyday》。实验室里也放歌，但是很明显，口味总是无法调和——以我为首的几个小孩儿绝对无法忍受刀郎，其余的小孩儿们则无法忍受《死了都要爱》。只有羽泉儿的《天使》大家都喜欢，于是就一遍遍的反复。

翻来覆去，反反复复。

我熬的一锅银耳，一直在火上咕嘟。我喜欢看那些泡泡，起来了又破灭了。我们的梦想是这样的吗？小时候的我，可是把下雾就叫成下“梦”的啊！

小时候的我再也不会回来了。我甚至还没有经历过《蓝色大门》中那个叫张士豪的男孩子的青春，就被告知说：“嘿，你不能这么年轻了。”我总会留下些什么吧，留下什么我就变成什么样的大人。

进来的我会miss出去的我的偶像，老去的我会miss逝去的我的年少时光。

“小士 看著你的花襯衫飄遠

　　我在想

　　一年後 三年後 五年後

　　我們會變成甚麼樣子呢

　　由於你善良開朗又自在

　　你應該會更帥吧

　　於是我似乎看到多年以後

　　你站在一扇藍色的大門前

　　下午三點的陽光

　　你仍有幾顆青春痘

　　你笑著

　　我跑向你問你好不好

　　你點點頭

　　三年五年以後

　　甚至更久更久以後

　　我們會變成甚麼樣的大人呢

　　是體育老師 還是我媽

　　雖然我閉著眼睛

　　也看不見自己

　　但是 我卻可以看見你”

——电影《蓝色大门》

冰火岛——我坚决不能容忍

近日以来，因为访问一个space出现种种问题，遂决定，用诗坛芙蓉赵丽华诗，骂一下msn。并且希冀凭借关键词“诗坛芙蓉赵丽华”的反复出现，提高博客点击率……

我坚决不能容忍

那些

在msn

的space上

写东西

又要设

浏览权限

的人。

我如此的崇拜他（二）

一

最近，有人对我说，我发现你不像以前那么崇拜他了。

噢？真是这样吗？

二

到底什么是崇拜呢？

有的人最鄙视谁崇拜谁了。他说我们一定要有个性，没必要崇拜一个人。要相信自己，自己才是最强的。

有的人说崇拜是一个很神圣的字眼，他永远也不会想到去崇拜什么人，他也永远不会奢望有谁会去崇拜他。

我还很崇拜王菲，但她离我真的很遥远。

那到底什么是崇拜呢？

三

每个人心中，都有一种理想的状态。

我们要做一个优秀的自己。

一个无愧于心的，令人称道的，优秀的自己！

四

崇拜的产生，就是因为我的目标太高以至于我无法达到。

而被崇拜的产生，就是因为他已经达到了我无法达到的目标。

所以，我对他的崇拜，永远也不会停止！

永远也不会停止！

五

我只是钻石，

而他是玉；

我只是动人，

而他动心。

六

这是我在今年9月7号写在notebook上的一段话：

“Happy birthday to Jianning! He is my distaining solution which can purify my heart. He is one of the guys I never wanna lose.”

总而言之，He is too nice to believe!

七

有人说他这是“滥情”，说他对每个人都太好，以至于让人觉得不适应。

我不这么认为。

这只是他的道德底线比我们的高罢了。

他的道德底线高到了一个我渴望达到而我不能达到的程度。

八

这就是distaining solution的功效。

他能改变我。

他让我朝着他的方向努力，他是我的好榜样。

九

我还有一个很好的朋友，他也是心（清）如水的人。不过我不崇拜他。到了他生日的那一天，我想我会写成这样：

“Happy birthday to Qingqing! He is my ddH₂O which can smooth my heart. He is one of the guys I never wanna lose.”

十

这两天看新版的《神雕侠侣》，想到了一个问题：

郭襄是不是英雄？

十一

不知道是不是因为烦黄晓明，我一看到郭襄盲目崇拜杨过的样子就直起鸡皮疙瘩。

我觉得金庸把这种感情处理成爱情是不对的，以致于到了后来非要把峨嵋派都搞成一群怨妇，简直是天大的冤枉！

他肯定是从来没有过崇拜别人的经历的。

十二

我想，郭襄崇拜杨过的行为是过激的。

她的孩子气给杨过带来了太大的压力。

偶像不是拿来依赖的。

偶像是拿来学习的！

十三

“你怎么会觉得要依赖我？”

这是个好问题！

十四

我一直在听《晴朗的一天》。

我就想，我应该像蝴蝶夫人一样，站在海边，以我自信的力量，迎接我的偶像。

十五

我如此的崇拜他，

我就会想，我该如何的崇拜他。

不要沦为了郭襄，那我就不配崇拜他了。

十六

所以我要努力，朝着他的方向。

但是其实，我的努力，也正是朝着我要的方向。

努力不止，崇拜不息。

十七

感谢上苍赐予我这样一个贵人，让我的目标变得这样的具体和活灵活现。

十八

为了强化我的信念，

我还要对他说：

“When you need help, please let me know. It’s my great pleasure to do something for you!”

十九

我如此的崇拜他，以至于我希望我能成为他那样；

我如此的崇拜他，以至于我永远也成不了他那样。

廿

我像一个花痴一样，哈哈！

P.S. 其实我还是很欣赏郭襄的有一点的。那就是杨过对小龙女如是的描述她：“她是这么说的，便是这么想的。”

我的小弟

以下源自我的小弟的blog

我的师父

评论(5)发表时间：2006年8月19日 10时6分

新手干活总要有个师父带一带的，刚来实验室那天，老板给我安排了一位师父。
    说是师父，其实也是与我同一届的，只是在这边做了毕业设计，比我在这边多待了5个月。
    他是北师大生命科学院的学生，高考的时候离北大生命科学院差了若干分，于是去了北师大，不过北师大生命科学院的录取分数线也只比北大低了若干分。
    在我看来，我师父是个非常适合做科学的人，也应该算得上人才。其貌不扬，思维灵活，生物学基础扎实，在实验室的众人中算得上是优秀者，总喜欢谈论实验。我算是个外行，来这边半个月也从他那里学到了不少东西。
    我师父除了科研能力不错外，也有些许艺术细胞，高三时过了钢琴九级，还会一点美声唱，昨天实验室一伙人去K，师父还SHOW了几段RAP，有点感觉。

现在我尽力按照他的口吻，回应如下：

到了新建立的实验室总是很容易成为师傅。在我等待小弟的若干天之后，老板终于给我安排了一个小弟。

说是小弟，其实也是与我同一届的，只是没有在这边做毕业设计，比我在这边少呆了5个月。

他是江南大学食品工程专业的，是我的一个很嘴的高中同学的大学同学。（说实话，这让我感到很汗）

在我看来，我的小弟是一个非常能够接受新东西的人，绝对是个人才！不但长相英俊，而且思维灵活。他从未接触过分子生物学和生物化学的实验，但是，短短一个月，他就能够完全掌握并且融会贯通。我想，我是绝对不会有这样的能力的。我的绝大部分的数据是经由他的手做出来的，没有他，我不可能在短短的rotation两个月中做出那么多重要结果。更牛的是，他很快就能学会看paper和听seminar。很多人做了一两年实验都还不知道自己是在干啥，而我的小弟，绝不是这样的人。很快，他就会成为实验室的众人中的优秀者。

我的小弟除了科研能力不错外，也有些许运动细胞。很明显，他篮球必然打得很好，虽然我从来没有看到他show过。

以上只是是为了对偶，这些都不是他出众的最主要的因素。更重要的是，他人非常积极乐观健康向上。这是一种生活态度，不是很多人都具有的。每天的生活都很枯燥，我们须要自己找乐子。在这方面，其实我们很像。

比如，在铁路旁边的烧烤摊吃烧烤和喝啤酒，深更半夜沿着僻静的田野往宿舍走并且担心着会不会出现大于等于两个的大男人来抢劫，绿豆排骨汤等等。我亲爱的小弟啊，无论如何，你一定要坚持住积极乐观健康向上的良好心态啊！

当然，还要记住，我是很nice的。

当然，我其貌很扬！！！这是重点。

当然，实验累了，看看别人的blog说我其貌不扬其实也是件很happy的事情。

我与C. Ronaldo的相同之处

Isolation of RAD51C

as a Cul3 adaptor BPOZ2 binding protein

in a yeast two hybrid screen

Abstract

Cullins (CULs) are subunits of an important class of RING ubiquitin ligases. Whereas the subunits and substrates of CUL1-associated SCF complexes are well characterized, they are largely unknown for other cullin family member. Recent studies show that BTB protein may serve as an adaptor to recruit substrate for Cul3. Here, I demonstrate that BPOZ2, a BTB protein, binds RAD51C via the second BTB domain, which also has been shown to interact with Cul3, in a yeast two hybrid assay. Moreover, since RAD51C was shown to negatively regulate ubiquitin-mediated degradation of RAD51 upon DNA damage repair, I suggest a model that the binding of RAD51C to BPOZ2 might release RAd51 from BPOZ2/Cul3 ubiquitin ligase complex, thus attenuating the degradation of RAD51. I further speculate that RAD51C may play a significant role in the termination of DNA damage repair.  

Key words

RAD51C; BPOZ2; Cul3; yeast two hybrid; ubiquitiniation

Introduction

Most cellular processes require a tightly controlled balance between the protein synthesis and degradation. Regulating protein turnover allows living cells to adapt rapid change of the internal and external environment.[1]

Ubiquitin-dependent degradation by the 26S proteasome has emerged as one of the most important mechanism to control protein turnover and cellular homeostasis. Convent attachment of a polyubiquitin (at least 4 ubiquitin) of the substrate mediates its recognition and subsequent degradation by the proteasome.[2]

Ubiquitination requires a cascade of three enzymatic activities of ubiquitin activating enzyme(E1), ubiquitin conconjugating enzyme(E2) and ubiquitin ligase (E3). Ub is first activated by the E1 in an ATP-dependent manner through the formation of a thiol ester bond between a reactive Cys in the E1 and the carboxy-terminal Gly of Ub. Ub is then transferred from the E1 to a catalytic Cys within an Ub conjugation domain of E2 enzymes. Attachment of an activated Ub is mediated by a specific E3 ligase or E3 ligase complex that interacts with both the target and the E2. This association generally facilitates the covalent attachment of Ub via an amide linkage to the ε-amimo group of an internal Lys residue within the substrate. E3 enzymes promote the transfer of Ub from the E2 to the substrates. Repeated transfers of Ub to the internal Lys residues of already attached Ub results in the formation of Ub chains. It is generally thought that Ub chain assembly is mediated by the same E2/E3 complex.[3]

The E3 ubiquitin ligases provide two major functions: one is to catalyze the isopeptide bond formation and the other is targeting the special substrate. Two main E3 ligase families have been described: The HECT-domain family defined by its homoloy to E6-associated protein (E6AP) carboxyl terminus and the RING family that contains either an intrinsic RING-finger domain or an associated RING-finger protein subunit essential for ubiquitin ligase activity.[4]

Genetic and Biochemical studies, mainly in budding yeast, have allowed the identification and characterization of two major types of RING-H2 E3 ligases: the APC/C (anaphase promoting complex/cyclosome) and the SCF complex (Skp1, Cullin, F-box). APC/C controls the onset of anaphase and exit from mitosis by degrading securin and cyclin B, while SCF ensures timely entry into S phase by triggering the degradation of the CDK-inhibitor Sic1. [5]

SCF is a macromolecular complex containing at least four subunits: the cullin Cul1, the ring-finger protein Hrt1 (also called Roc1 and Rbx1), the linker Skp1, and a member of F-box protein family. In addition to Cul1, there are several other cullins family members, including six closely related members (Cul1, 2, 3, 4A 4B and 5) and three distant relatives (Cul7, Parc and APC2), each assembling one or a class of active ubiquitin ligase complex.[6]

Cul3 is one of the most important members of the cullin family. It is a central scaffold protein thought to mediate in the assembly of an SCF-like E3 ligase complex. In detail, Cul3 is a 768-aa protein, which interacts with a lot of proteins, such as Roc1 (binding E2), Nedd8 (neddylation regulating the E3 function), Cop9 (an isopeptide, necessary for deneddylation activity), Cand1 (blocking the interaction between the Cul3 and substrate adaptor) and the substrate or substrate adaptor protein.

Current understanding of Cul3 functional is mainly based on genetics. Cul3 knock-out mice is lethal and the embryo cells are accumulated in S phase. In C. elegans, rlf-1 deficient in neddylation shows that ectopic cleavage furrows forms during cytokinesis, mitotic spindles are misoriented, and nuclei becomes displaced toward the cell cortex after mitosis. And the Cul3 RNAi mimic the rlf-1, exhibiting that the spindle poles only achieve only 60% of wide type inter-chromosome distance and the astral microtubule is short in mutant embryos. Moreover, astral microtubule is also diminutive in cop9 embryos. In Drosophila, cul3 mutant leads to zygotic lethal and abnormal sensory organ development.[7]

Available evidence suggests that not all the cullins associate with the same subunits. For example, Skp1 binds Cul1/cdc53 but does not interact with other cullins as shown by yeast two hybrid and immunoprecipitation. Besides, ElonginC specifically binds the amino-terminal domain of Cul2 but not Cul1.[2] However, at present, the substrare-recognition elements of Cul3 have only just begun to be understood. Several recent reports identified so-called BTB domains (Broad-Complex, Tramtrack, and Bric-a-brac) as binding to the N-terminal region of Cul3. For example, in C. elegans, MEI-1 binds Cul3 through the BTB-domain containing adaptor MEL26, and in Homo sapiens, the BTB domain-containing SPOP is also an adaptor of Daxx for ubiquitination by Cul3-based ubiquitin ligase.[8-10]

The BTB domain is an evolutionary conserved domain that was originally described in Drosophila. It is reported that BTB domain serve as a protein-protein interaction interface via homodimerization, multimerization, or through heterophilic interaction. Furthermore, many studies have shown that additional conserved motifs were found in association with BTB domain, including kelch repeats, zinc finger domain, MATH domain, MATH domain, b-zip DNA binding domains, FYVE finigers, ankyrin repeats, histone fold domains, transmembrane domains, AT-hook and uncharacterized globular domains.[8] Examples of the BTB domain have been identified in organism from yeast to human. With about 100 distinct BTB entries in available sequence database, it is estimated that 5% to 10% of the zinc finger proteins in human contain these domains. [11]

BPOZ2 is a newly identified BTB protein from the leukocyte cell cDNA library in 2000. Its sequence codes 478 amino acid residues from an open reading frame of 1434 bp, with a predicted molecular mass of 53.9 kDa. Sequence pattern analysis shows that BPOZ2 contains N-terminal ankyrin repeat, a bipartite nuclear localization signal and two BTB domains. Using semiquantitative RT-PCR, the BPOZ2 transcript was found to be ubiquitously expressed in all fatal tissues suggesting that BPOZ2 is involved in basic cellular function. Low expression of BPOZ2 in adult tissues suggests that BPOZ2 may play a role in developmental process. Chromosomal localized between D3S1269 and D3S3606 markers corresponding to the region of chromosome 3q21, a region frequently associated with leukemia. [10-11]

The previous work in our lab suggests that BPOZ2 is an adaptor protein for Cul3 through its BTB domain (BTB domain 2, BTB2). And in yeast two hybrid with the bait BPOZ2, EF1A was cloned and characterized. Advanced study suggests that EF1A interacts with BPOZ2 via BPOZ2’s ankyrin repeat. To find more interactors, I use a truncated BPOZ2 as bait, identifying that RAD51C as a binding protein of BPOZ2 via the BTB2 domain.

Materials and methods

The yeast two hybrid system--Protein interactions were analyzed using GAL4 fusion proteins in yeast two hybrid. Saccharomyc cerevisiae stain is L40, stored in my lab. The truncated BPOZ2 is constructed on the plasmid PLEX-ADE, fussed with BD (GAL4 binding domain) at the N-terminal, called bait. And the HeLa cDNA library is constructed in plasmid PACT-2, fussed with AD (GAL4 activating domain) also at the N-terminal, called prey correspondingly. The cDNA library is reverse transcripted from the HeLa mRNA, with an average length of more than 1000 bp. 

Autoactivation testing assay--The autoactivation was tested using the cultivation on the media restricting growth to combined tryptophan and histidine. The plates contain either no 3-aminotriazole (3-AT) or 10 mM 3-AT.

Bait and prey testing assay—Selection for the presence of both the bait and the prey plasmid was achieved by cultivation on the media restricting growth to combined tryptophan/leucine prototroph.

Interaction testing assay—The transformants were selected for growth on the tryptophan/leucine/histidine-deficient plates containing 10 mM 3-AT.

Yeast DNA isolation—yeast plasmid was rescued from positive clones and then transformed into E. coli. Strain HB101 cultured on the leucine-deficient plate.

Truncated BPOZ2 construction—The N-terminal 1-76 amino acids were deleted for the BPOZ2-ΔAnkyrin repeat (BPOZ2-ΔAnk); the 99-213 amino acids-deficient protein is BPOZ2-ΔBTB1; and the protein lacks 251-373 amino acids is BPOZ2-ΔBTB2. These truncated BPOZ2 are all constructed on the PLEX-ADE.

Results

The autoactivation of the bait can be inhibited by 10mM 3-AT—Our previous work indicated that full-length BPOZ2 interacts with prey EF1A via ankyrin repeat in a yeast two hybrid screen. But we never found any other interactors. Thus, in order to find other proteins interacting with the rest domains, Ankryin repeat-deleted BPOZ2, which should not bind EF1A is needed. To avoid false positive result, we perform bait autoactivation test assay at first. Although the BPOZ2-ΔAnk can active the reporter gene more or less, fortunately, this activation can be removed just with the presence of 10 mM 3-AT.(Fig. 1) Therefore, BPOZ2-ΔAnk can serve as a qualified bait in the yeast two hybrid.

Cloning and characterization of RAD51C—To identify what might be involved in binding BPOZ2 free ankyrin repeat for ubiquitination, we perform a yeast two hybrid screen in which the truncated BPOZ2 was used as bait. Clones that scored positively for interaction with BPOZ2-ΔAnk was picked out and sequenced the prey plasmid. The sequencing result of these interactors revealed that there were full-length and portion of the protein RAD51C, also known as RAD51L2. (Fig.2) This protein is a member of RAD51 family, defined by genetics in yeast. This family includes the RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, XRCC1, XRCC2 and HsDMC1, which plays important role in DNA homologous recombination.

Among all the 20 randomly sequenced yeast clones, three are defined as RAD51C. 1 is the full length ORF, the other two lacks several nucleotides at the 5’ end. Thus, these three clones may come from different original plamids, which strengthened the validation of the result.

BTB2 is required for the interaction between RAD51C and BPOZ2—To indicate the yeast hybrid with a truncated protein above is not artificial, I make sure that the full length BPOZ2 indeed binds to the RAD51C also by a yeast two hybrid. The binding of the RAD51C to the BPOZ2 may process significant activity in living cell. To determine the function of this interaction, truncated proteins were generated. The yeast two hybrid shows that the BTB2 domain is required for interaction while the rest two domains may not be involved in this binding. (Fig. 3)

Discussion

The present studies have demonstrated that BTB protein BPOZ2 might serve as an adaptor protein of Cul3-mediated ubiquitination pathway. In addition to BTB domain that mediates the interaction with Cul3, BPOZ2 also contains an ankyrin repeat and other BTB domains that function in protein-protein interaction. The deletion of the BTB2 domain abrogates the BPOZ2 and Cul3 binding. And the deletion of the ankyrin repeat blocks the interaction between the BPOZ2 and the potential substrate, such as EF1A and so on. In this thesis, I also exhibit that BTB2 domain is needed in the BPOZ2 and RAD51C interaction. Taken together, these results might indicate that RAD51C possibly competes with Cul3 to decrease the degradation of certain substrate.

Guessing the right substrate which RAD51C protects needs the more understanding about RAD51 family. In the yeast Saccharomyces cerevisiae, the RAD50 to RAD57 genes are all involved in the recombinational repair of DNA damage, including DNA double-strand breaks (DSBs), as well as playing a role in meiotic recombination. The yeast Rad51 protein has been demonstrated to encode a strand transfer protein, which is a homolog of Rec A in E. coli. The RAD51 family contains RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, XRCC1, XRCC2 and HsDMC1. [12] These family members are all required for normal levels of recombination and DSBs repair. Each of the paralogs has now been disrupted in chichken DT40 B lymphocytes. All knockdown lines were found to be viable, an observation distinguishes from the RAD51^-/- mutant cell line. However, RAD51B^-/-, RAD51C^-/-, RAD51D^-/-, XRCC1 ^-/-, XRCC2^-/- cells all exhibit a reduced growth rate and chromosome instability. The mutants accumulate spontaneous chromosomal breaks, presumably as a consequence of stalled or broken replication forks. [13] At present, increased evidence indicates that RAD51C forms complex with RAD51B, RAD51D and XRCC2 or heterotetramer with XRCC2, functioning in the HR and DSBs repair. [14]

One of the most exciting observations of RAD51 is that it is degraded via the ubiquitin-mediated protosome pathway and regulated by RAD51C. It is reported that prior to the DNA damage, only occasional nuclear foci were observed. However, there is a distinct increase in the number of nuclear foci after the DNA damage, and as time progresses, the number and the size of these foci peak between 2 and 4h. At t=6h, the number of RAD51 foci is noticeably diminished, and at 8h the staining appears the same as t=0. What is more, study also shows that loss of RAD51C results in accelerated degradation of RAD51 soon following DNA damage. Cells treated with siRNAs against RAD51C showed nearly a complete loss of RAD51 at 2h after the DNA damage and what appears to be an approximate 20% decrease in RAD51 protein levels in the absence of DNA damage. The amount of the RAD51-Ub trapped by epoxomicin, a proteasome-specific inhibitor, in the RAD51C siRNA cells, is approximately two to three times greater than that in WT. Therefore, it appears that ubiquitination and proteasomal degradation of RAD51 is a normal part of DNA repair process and RAD51C plays an integral role in regulating this effect. [15]

Based on the study above, it seems that RAD51C might compete with cul3 to protect the RAD51 from degradation in advance. It is possible that the termination of DSBs repair is via cul3-BPOZ2-RAD51-mediated ubiquitination pathway, and RAD51C blocks the pathway to wait for the “opportune moment” to terminate it. (Fig.4)

To improve this work, the detailed relationship of Cul3, BPOZ2, RAD51, and RAD51C should be certified. And what signals the so-called “opportune moment” has to be made sure. The molecular mechanisms about the network of ubiquitination and DNA damage repair are largely unknown. Considerable additional work will be necessary to fully understand this molecular mechanisms and physiological signal pathway.

Reference

[1] Manabu F. et al. Targeting of protein ubiquitination by BTB-Cullin 3-Roc1 ubiquitin ligases. Nature Cell Biology. 5, 1001-1007 (2003)

[2] Lionel P. et al. Cullin-based ubiqutin ligases: Cul3-BTB complexes join the family. EMBO. 23, 1681-1687 (2004)

[3] Shouhua W. et al. Cullin3 is a KLHL10-interacting protein preferentially expressed during late spermiogenesis. Biology of reproduction. 74, 102-108 (2006)

[4] Rory G. et al. BTB/POZ domain proteins are putative substrate adaptors for cullin 3 ubiquitin ligases. Mol. Cell. 12, 783-790 (2003)

[5] Jeong E. K. et al. BTB domain-containing speckle-type POZ protein (SPOP) serves as an adaptor of Daxx for ubiquitination by Cul3-based ubiquitin ligase. JBC. 281, 18, 12664-12672 (2006)

[6] Andrew W. et al. RhoBTB2 is a substrate of the mammalian Cul3 ubiquitin ligase complex. Gen & Dev. 18, 856-861 (2004)

[7] Tucker C. et al. All in the family: the BTB/POZ, KRAB, and SCAN domains. Mol. & Cel. Bio. 21, 11, 3609-3615 (2001)

[8] Ken-Show D. et al. Molecular cloning and characterization of a novel human gene containing ankyrin repeat and double BTB/POZ domain. Biochemical and Bio physical Research Communications. 273, 991-996 (2000)

[9] Natalia S. et al. Ub on the move. JCB. 93, 11-19 (2004)

[10] Lionel P. et al. The BTB protein Mel-26 is a substrate-specific adaptor of the Cul-3 ubiquitin-ligases Nature. 452, 18, 311-316 (2003)

[11] Sarah L. et al. The BTB protein MEL-26 promotes cytokinesis in C. elegans by a CUL-3-indepent mechanism. Cur. Bio. 16, 1605-1615 (2005)

[12] Manjit K. et al. Isolation and characterization of RAD51C, a new human member of the RAD51 family of related genes. Nuc. Aci. Res. 26, 5, 1179-1184 (1998)

[13] Jean-Yves M. et al. Complex formation by the human RAD51C and XRCC3 recombination repair proteins. PNAS. 98, 15, 8440-8446.

[14] John T. The RAD51 gene family, genetic instability and cancer. Cancer letters 219, 125-135 (2005)

[15] Brian T. Cellular localization of human RAd51C and regulation of ubiquitin-mediated proteolysis of Rad51. JCB, 96, 1095-1109 (2005)

Acknowledgement

I thank my advisor Dr. Feng Shao for guiding me so carefully and patiently. When I was trapped in troubles, he always helped me with his wisdom and passion. I also thank Mei Shen for her teaching me to carry out all the procedures of the yeast two hybrid and the plasmid construction. Guolun Wang, Na Dong, Jianning Ge and other members in my lab also gave me supportive suggestions when my experiment encountered difficulties. And I will never forget all my teachers in BNU during the last 4 years, who gave me the basic knowledge in biology. Also, my family and friends made me warm when I felt depressed.

Thank all the persons with a kind heart. 

以下转贴的都是6月的大事

　　世界杯搅乱了国人的生物钟，却篡改不了年少的轻狂，也遮蔽不住长者的坚持。

　6月，东方古国留下了软脚的足球队，转而派出24岁的辽宁帅哥郎朗进军德国。在慕尼黑的舞台上，65岁的多明戈和70岁的祖宾·梅塔，引领着万千观众为钢琴王子喝彩。而31岁的康辉，携同小他N岁的李梓萌登陆央视《新闻联播》，却一时毁誉参半，老少暂不咸宜。同一夜，70岁的林兆华寄情《白鹿原》，把一群绵羊赶上了首都剧场的舞台，而23岁的郭敬明则拒绝就抄袭而道歉，继续用无知展露其所谓无畏。

　　当平均年龄为72.3岁的1000多名院士会聚京城，共议如何让中国的科技创新力变得年轻起来之时，平均年龄为18岁的950万名年轻人，则人手一笔，各皱两眉，于初夏的寒窗下努力让自己变得复杂。一向被视为文化风向标的高考作文题，今年的视角愈发社会化，而不拘泥于校园墙下。北京的孩子们需研究城市的符号，上海的孩子们则准备握住旁人的手。如果以“郭敬明该不该道歉”为题，这已接近“90后”的一代，会在这影响着人生前半场命运的考场上直抒胸臆吗？

　　恐怕再年轻的后生，在高考的试卷上也不会过分地洒脱。那么，被无厘头粉丝环绕的郭敬明，就能够洒脱到底吗？畸形的崇拜之力，就可以让小郭视法律判决的道歉为无物吗？此番担忧，与年龄无关。正如同古稀之年的林兆华，仍不屑于将自己平庸地归于戏剧风格的某类。他于53岁的陈德铭从苏州到陕西赴任时就开始热孵《白鹿原》，待4年之后，这出陕西大戏才从容破蛋，与57岁的卸任陈省长共赴京城，接受新的考验。慢工出细活，久孵出壮儿。虽同是本领域内的先锋，但论艺术底盘之坚实，小郭与老林，远不只差一个档次。

　　长者虽淡定，却仍需志存高远；后生虽意气，也要防人言可畏。康辉与李梓萌甫一亮相，就引来众议。有人嫌他俩太年轻，有人看不惯他俩的微笑。这都是旁枝末节的杂议，见仁见智，不足为虑。倒是文化类型间的不同特质，决定了不同的舞台对拂面新风的承载力并不一致。首都剧场听得洪钟大吕，也容得奇谈小调，戏剧本身就以多元化和包容性为生命。而央视最重要的一档新闻窗口，却并非海纳百川的逍遥过场，而是泱泱大国新闻传播文化的基座，但求严谨端正，不求流派争艳，需以比时代最新潮流慢上半拍为美。一旦此窗口所代表的文化基准线水到渠成地前移，则诸位主播的个人风格必随之而动，不用观者多虑。届时，罗京亦可灿笑，康辉也需持重，新人老将皆风流，何需扬鞭自奋蹄。

　　少壮一努力，老大不伤悲。世界环境日那天，几十万京城人士响应“少开一天车”的环保号召，弃车而行。如果较真地用电脑公式去演算由此少排了多少污浊气体，未免迂腐。这由环保精神引领的行为，不过一种文化姿态，告诉我们新与旧两种出行方式，不见得你死我活，而或许是相得益彰。徒步、自行车与公交，皆诞生于轿车文明之前。如今四个轮子上的生活铺天盖地，老一代出行方式也犯不着妄自菲保

　　“少开一天车”的次日，满街就涌出新婚的车队。“666”能杀灭蚊蝇百害，“666”也能促进百年好合。不必去争论这是旧俗还是新潮，二者间本来就不是PK台上执手相看胜败的超女。下一个好日子就要到来：7月1日，青藏铁路通车。零岁的钢轨，铺开数十年的梦想，将百岁的机车，送上数千米的高原，去触摸万年冰川的脉搏。

　　在新世纪新人的欢笑声里，老迈的崇山峻岭与资深的文化积淀，都或许会暴露出返老还童的机关，任由一阵新风开启并相伴一程，飘落回时代舞台的正中。

我如此的崇拜他

我如此的崇拜他，

以至于我并不知道是为什么。

我的歌唱得比他好，

我的口味没有他挑，

我设计的试验逻辑也比他的精巧，

但是，

这些都并不重要。

我如此的崇拜他，

以至于我并不需要知道是为什么。

我如此的崇拜他，

以至于我自惭形秽，

默许他的每一次发落。

我只能玩笑他的歌唱得不好，

他的口味太挑，

他设计的试验逻辑也没有我的精巧，

但是，

这些都并不重要。

我如此的崇拜他，

以至于我趾高气扬，

抗争他的每一次发落。

我如此的崇拜他，

以至于我希望我能成为他那样；

我如此的崇拜他，

以至于我永远也成不了他那样。

我只是钻石，

而他是玉。

我只是动人，

而他动心。

幸好

所有的彩虹糖都洒在了地上，

幸好有一颗已经含在了嘴里。

所有的故事都有了结局，

幸好这世上还有blog未完待续。

所有的鸟儿都回归了山林，

幸好你还在我身旁，没有离去。

天色已晚，

春风已暗，

何处是希望？

可 乐

既然巧克力会让人发胖，

那么，

如果坚持不喝咖啡的话，

便只好喝可乐。

以下为引用~~~~~~~~

性格中的死穴—— 1）一切凭状态，需要安全感。 都说处女座另类，双重性格，甚至有点神经质，其实原因只有一个，处女座的一切都要随自己外显的性格而转，姑且称之为“状态”。处女座状态好的时候，可以将自己聪明、细腻、能干、温情、幽默、有内涵等优良品质完全外展，此时他们显得如此完美，光芒四射，并且可以表现得非常外向、健谈，容易与人打成一片（这本非他们的性格）。而一旦处女座状态不好，便会变成另一个人，甚至非常窝囊，一事无成，不过通常此时他们都躲了起来，不会让人看见。正因处女座深知自己这样的性格，理智的他们选择了在状态好时多做事，多活动，多完成些人生目标，因为他们无法确知何时糟糕的状态会到来，甚至有时为此不得不推迟自己的计划，或出现让人难以理解的行为模式。这种状态的变化表现在人际交往上特别是恋爱中便是下面所述的忽冷忽热。因此，处女座需要绝对的安全感，这是一种说不清道不明的东西，反正就是不会让处女座感到不舒服，易诱发糟糕状态的感觉。很多时候，安全感来自于他们独有的私人空间。总之，状态好时，处女座是大众的宠儿；状态不好时，却是世界的逃兵。 2）忽冷忽热。 不知见过多少关于处女座忽冷忽热的帖子，这种性格也造成骂声一片，或是让爱他们的人感到委屈和无助。同为水星守护，处女和双子一样善变，但双子善变的是心思，处女善变的却是情绪。也不仅仅是多愁善感一词可以概括，很多时候处女座会莫名地陷入悲痛和自责中（自我批判精神和完美主义倾向），这在表面便是情绪上的低潮期。在冷时，处女座最希望躲进自己一个人的世界里，独自在孤独和冷漠中调整自己的情绪，等心事已了，调整到热时再走出来。然而世界并不因你而转，很多时候处女座要面对很多实际的琐事，这时的处女座变不得不在冷中面对周围世界：要么说话做事很不自然，有做作的痕迹；要么便极度冷漠和被动，对谁都不理不睬。其实处女座很清楚自己现在的样子，但他们无力改变和控制自己的情绪，只能选择疯狂地逃避一切。他们想得是：与其很不自然地面对你，尴尬地和你说些无关痛痒地话，或是因和平时反差太大而被人说成表里不一，性格怪异，还不如先躲一阵子，等调节好了以后再出来。所以，在与人交往中，他们只会和不得不交流的人（实在躲不掉）或是完全陌生的人（反正无所谓）交谈，而和熟悉的朋友反而疏远。你在他心中地位越重，他躲得你越远。特别是恋人，他只会让你感觉到他的存在，而不让你触碰到他或是见到他，即通常所说的若即若离。原因很简单：他只想给你一个最好最完美的自己，而不愿让你看到他无助脆弱的一面。所以请记住，有时处女座对你冷，绝不是你说错作错什么，这是他们正常的生理现象，他们只是不想让严寒和冰霜伤害了你（可事实上这种做法已经伤害）。不必难过，因为他们在乎你的话，他们的内心比你还要难过、自责和内疚！他们所能做的，只希望快点调整好情绪，回到你的身边。 正基于以上两点，处女座有时便会表现出非常另类的行为和思维模式。他们的性格也很多来源于此：不喜主动，不善交际（我们也可以热情，只是今天热了，终有一天会冷的），不爱表现，不喜抛头露面（万一哪天情绪无法把握状态不好时，岂不大失脸面），诸如此类。 一些“争议”性格 关于“洁癖”——并非处女都有洁癖，很多处女座并不爱干净，但却要求整洁，他们更多的是井然有序，不喜欢别人破坏他们所整理和布置的“完美”格局。处女座更多的是有精神洁癖。一旦触碰到他们精神上的禁区，严重时会表现得歇斯底里。 关于“花心”——一般说来处女座绝不花心，忠诚是他们的代名词。异性关系多很可能是他们需要确定一个好人缘和自己有魅力，来反击那些普遍观点。一旦找到心中真爱，他会呵护你一辈子，只要你能给他安全感，他永不背叛，心中眼中唯你一人。寻花问柳，红杏出墙这些事与他们绝缘（一是责任感所致，二是怕麻烦）。 对处女座的评价 关于“聪明”——不似双子灵活机巧，不象水瓶创意非凡，也不是天蝎的那种计画周密，处女座更多体现的 是智慧。细腻、理性、好学加上十二星座里一流的洞察力和最强的逻辑思维能力，处女座想不聪明都难。 没事少在处女座面前信口开河，随意撒谎，很多伪纱他们一眼便能看透；也别跟他们玩什么心计，你玩不 过他们的。处女是那种可以把你卖了你还得向他道谢的类型。没事也少跟处女座辩论，他们没理也可找出 理，甚至找出不止一条理来。处女是永远不会吃亏的。不过很奇怪，有时处女座会经常刻意地表现出很单 纯很愚蠢很好欺负的样子，原因只有他们自己心里清楚。 关于“单纯”——处女座很纯真，但绝不单纯，他们内心复杂得让人难以想象，很多不经意的事可能都是他 们精心布置的。处女座也总在纯洁和好色之间徘徊，这一点最难说清。不过他们真正的内心是极其善良的， 宁可自己苦也不愿伤害任何人，心灵如水晶一般晶莹剔透。 关于“幽默”——都说处女座冷若冰霜，缺乏幽默。多和他们接触吧，你会体会到什么是冷幽默，什么是真 正的幽默，而并非品位低俗的搞笑 。 关于“迟钝”——别看你和处女座说某些提议时他们半天才反应过来，在你说好的一瞬间，他们脑子里可能已 经转过五六个你这项提议会造成的后果（通常是消极后果）了。他们总是想得太多，绝非想得太慢。 关于“自私”——处女座的自私觉不是狮子的那种惟我独尊，也不是水瓶的以自我为中心。处女座正因为是无 私的，所以显得自私。（能够理解吗？）因为处女不想伤害任何人。 关于“逃避”——由于处女座性格上的因素，他们通常会显得压力很大。当周遭的事物已无法掌控，或是自己 的情绪无法调节好时，他们会疯狂地逃避，堕落自己，这种状况通常对别人无害，却是伤害自己，让所有爱 他们的人感到心碎。不过不用太担心，过一阵子他们自己会好的，他们天性的自我批判精神很快便会起作用。处女座一般不会彻底堕落，堕落前可能都已留有余地，只是在等待着希望的来临。甚至有时堕落都是做给别人看的。 关于“内涵”——处女座有涵养这一点是肯定的。在成长中不断吸取教训，不断学习，取人之长来丰富自己的 内涵。因为他们感觉到情绪无法把握，而这些是自己可以踏踏实实做到的，将来一定有帮助。这是他们所追 求的完美主义目标。 处女座就是一个表面神秘到难以琢磨，说穿了却又很简单的星座。最接近神的人？可能吧，处女座喜欢这样 来标榜自己。因为他们确实有超凡脱俗的一面。他们的内心接近了神，可是身在这个世界，不能不食人间烟 火吧，所以必须得戴着一个面具活在这个世界上。 处女座喜欢和人说些暧昧的话，对心仪的对象却不好意思表白。 处女座希望别人了解自己，却又只将能公布的那一部分对外展示。 处女座是最有责任感的人了，可很多时候却害怕承担责任。

woo~~，说得跟真的一样。 但我以此为荣。

太阳

今天的太阳照得街道很明亮，

像开了路灯一样。

被太阳照亮的地方风也很大，

可是隔着玻璃的我却怎么也感觉不到。

一件小事

今天上网，看到陈凯歌大导演的《孩子王》的剧情介绍。里面有一个情节，讲的是一个人打赌说要写一篇作文。为了获胜，他居然先写了记叙砍竹子经历的作文，再去砍的竹子。然后，“孩子王”就花了很长时间来阐述"要写一件事，永远在事后"的道理。

这让我想起我在初中干过的一件小事。当时也是要写作文，题目我忘了。故意的，我中午在一本《XXXX作文大全》上看到了一个符合这个题目的文章，于是就背了下来。下午到了课堂上，我就凭着印象，把文章又默写了一遍。唯一的变化就是将主人公的名字改成了“杨良奋”。

这其实并不是最可恶的。之后的某一天，教语文的鲁老师把我叫到一边，说你这个文章是抄袭的吧。我居然说，你明明看着我上课写的，我抄什么了我！？

鲁老师可真是位好老师啊！她居然什么都没有说，只是说了一声：“哦，是这样啊。”她没有把我叫到办公室翻出那本其实非常畅销的《XXXX作文大全》当面对质，也没有说我品德上有什么问题，只是说“哦，是这样啊” 。

没想到，真没想到，这么轻的一句“哦，是这样啊”居然让我这么多年都不忘。

人无信而不立。"要写一件事，永远在事后"，我一辈子都坚持。

很多年以后

很多年以后

我的父母会离我而去

而我也将身为人父

很多年以后

她会有别的男朋友

而我

也不再想她

很多年以后

我会感慨于

我的朋友对他的孩子说

“乖，叫叔叔，这是你爸爸以前最好的朋友！”

很多年以后

我要站在讲台上

给我的最爱的学生们讲

DNA和王菲的关系

谁知道

谁知道

很多年以后

我们都在干什么？

我只想

我只想

这最好的时光

照旧延续